| 题名 | 初级纤毛在肺微血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用及机制研究 |
| 作者 | 秦荣 |
| 答辩日期 | 2019 |
| 导师 | 李雪雁 ; 陈克明 |
| 关键词 | 缺氧 氧化应激 初级纤毛 抗氧化酶 Nrf2 HIF |
| 学位名称 | 硕士 |
| 英文摘要 | 缺氧是导致多种急、慢性疾病的重要原因。在缺氧状态下,机体处于氧化胁迫状态,由活性氧（ROS）和其它自由基引起的脂质过氧化、蛋白质氧化、糖化氧化和DNA氧化损伤等可导致细胞凋亡和坏死,并进而引起组织结构与功能的退变。高原缺氧更是可以引起体内多系统暂时或永久性改变,甚至诱发高原脑水肿和高原肺水肿等致死性疾病。机体存在一套天然的抗氧化防御系统,包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPH-PX）、维生素E和抗坏血酸等,它们可以消灭或中和自由基以抵御氧化损伤。本课题组以前研究发现,初级纤毛在细胞抗氧化应激中起到重要作用,干扰掉初级纤毛后细胞的抗缺氧能力几乎丧失,相关抗氧化信号通路也被中断,但具体机制尚不清楚。本论文将就此展开进一步研究。本实验将生长至融合状态的肺微血管内皮细胞（PMVEC）进行如下处理:（1）将PMVEC细胞置于O2浓度为2%的密闭缺氧装置中培养0、6、12、18和24h;（2）先用siRNA法抑制PMVEC细胞的初级纤毛发生,然后将其置于密闭缺氧装置中培养相同时间。在倒置显微镜下观察上述经过缺氧处理的细胞形态,用免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜观察初级纤毛发生率以及长度变化,研究抗氧化信号途径相关因子的核转位及在初级纤毛的定位情况,检测氧化抗氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）的酶活力及氧化指标丙二醛（MDA）和活性氧（ROS）含量,用Western blot和RT-PCR法分析抗氧化信号途径相关因子的蛋白及其基因的表达变化情况。实验结果:缺氧处理导致PMVEC初级纤毛的发生率上升,长度增加,抗氧化酶活力则呈先显著升高然后逐渐降低的变化趋势,氧化产物含量先显著增加后又降低;用RNAi法抑制IFT88表达后,免疫荧光染色法观察到转染对照组（Negative control,NC组）的初级纤毛、抗氧化酶活力和氧化产物含量变化趋势与未经转染处理的正常对照组基本一致,但siRNA组抗氧化酶活性没有明显升高,氧化产物含量始终显著高于NC组;NC组抗缺氧信号通路中Nrf2、HIF-1α和HIF-2α蛋白表达量呈现先升高后下降的变化趋势,并发生明显的核转位;siRNA组上述蛋白的表达水平几乎无变化,无核转位发生。NC组Nrf2、HIF-1α和HIF-2α的基因表达量呈现先显著升高后下降的趋势,RNAi几乎无变化。上述实验结果表明,失去初级纤毛的PMVEC细胞较正常细胞的抗氧化酶活性降低,抗氧化应激相关信号因子蛋白和基因的表达水平下降,核转位消失,表明该细胞失去初级纤毛后,细胞无法启动其内在的抗缺氧损伤和抗氧化应激防御系统。此结果初步证明初级纤毛是细胞的氧感受器,同时也为抗缺氧药物研发提供了新思路。 |
| 语种 | 中文 |
| 页码 | 67 |
| URL标识 | 查看原文 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.lut.edu.cn/handle/2XXMBERH/95111]  |
| 专题 | 兰州理工大学 |
| 作者单位 | 兰州理工大学 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 秦荣. 初级纤毛在肺微血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用及机制研究[D]. 2019. |
| 个性服务 |
| 查看访问统计 |
| 相关权益政策 |
| 暂无数据 |
| 收藏/分享 |
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。
修改评论