| 题名 | 生物正交氧化还原体系的构建 |
| 作者 | 纪德彬 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2012-02-20 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 赵宗保 |
| 学位专业 | 有机化学 |
| 中文摘要 | 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是生命过程中通用的氧化还原辅酶和重要的小分子。创 制人工辅酶，实现对目标氧化还原过程的选择性调控，对系统生物学和合成生物学研究具 有重要意义。本论文以NAD+依赖型苹果酸酶(ME)为模型，研究构建可特异性利用NAD+ 类似物为辅酶催化L-苹果酸氧化脱羧反应的新体系，并验证了该体系的通用性。 设计并合成了11 个焦磷酸型NAD+类似物。以ME 为模型，在结构生物学指导下构建 了5 个双位点饱和突变文库。利用NAD+类似物和突变文库进行交叉筛选，获得15 个特异 性识别烟酰胺5-氟胞嘧啶二核苷酸(NFCD+)的突变酶。其中，ME L310R/Q401C 对NFCD+ 的kcat/Km 是96.7mM1s1，与野生型ME 对NAD+的kcat/Km 值214.8mM1s1 接近，说明该 生物正交体系具有与天然体系相当的催化效率。 获得了不同NAD+类似物与ME 突变酶的功能配对，并将ME 突变规律移植到乳酸脱 氢酶和苹果酸脱氢酶，在保守位点进行定点突变，均获得了相应的NFCD+偏好性突变酶， 说明构建的生物正交氧化还原体系可以推广到其他氧化还原酶。 利用双酶偶联法实现了NFCD+的循环再生，并发现仅供给人工辅酶NFCD+时，含ME L310R/Q401C 的细胞裂解液转化L-苹果酸只得到丙酮酸，无副产物乳酸，表明生物正交 催化体系具有特定的实际应用潜力。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 物理化学 |
| 公开日期 | 2012-07-09 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://159.226.238.44/handle/321008/116578]  |
| 专题 | 大连化学物理研究所_中国科学院大连化学物理研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 纪德彬. 生物正交氧化还原体系的构建[D]. 中国科学院研究生院. 2012. |
| 个性服务 |
| 查看访问统计 |
| 相关权益政策 |
| 暂无数据 |
| 收藏/分享 |
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。
修改评论