| 题名 | 珊瑚藻溴过氧化物酶的分离纯化及催化特性研究 |
| 作者 | 章表明 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2011-01-20 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 张卫 |
| 学位专业 | 生物化工 |
| 中文摘要 | 钒-溴过氧化物酶(V-BPO)是一类重要的卤素过氧化物酶，具有良好的热稳定性和有机溶剂耐受性，能够催化多种反应，表现出良好的工业应用潜力。 论文建立了V-BPO 的快速高效分离纯化新工艺。粗酶液加入0.5mmol/L 原钒酸钠和氯化钙后，经热沉淀、硫酸铵沉淀、离子交换柱层析纯化后，酶活总收率为83%，为文献最高值的3.8 倍，比活310U/mg，为Sigma 商品酶的3.1 倍。 研究了纯化后V-BPO 的酶学特征。亚基分子量为64.4KDa，最适pH 为6.0，对MCD、H2O2 和KBr 的其Km 值分别为14.7μmol/L、0.203 和9.7mmol/L，钒和钙离子能提高其活性和热稳定性，具有良好的有机溶剂耐受性，能够催化烯烃反应，产物溴代醇和环氧化物可 通过改变反应条件进行调控。研究了经过钙、钒离子透析处理后V-BPO 利用H2O2 为氧源催化氧化环己烯生成环氧环己烷体系的特征，建立了产物的内法定量分析方法，优化反应条件后体系时空产率为4.8g/(h•L)，对H2O2 收率为74%，均比文献最高值提高了78%，单位酶的催化效率为1.1mg/(U•h)，是文献值的4 倍。 建立了V-BPO 以O2 为氧源，Zn 为还原剂，催化氧化环己烯生成环氧环己烷体系，优化反应条件为：150mmol/L Tris-Citric, 100UV-BPO, 4mmol Zn, 1mmol KBr, 0.4MPa O2, 总体积10ml，65℃反应3h，搅拌速率700rpm。优化条件下，产物对环己烯的收率为31%，选择性为97%，并对反应机理进行了探讨。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 物理化学 |
| 公开日期 | 2012-07-09 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://159.226.238.44/handle/321008/116484]  |
| 专题 | 大连化学物理研究所_中国科学院大连化学物理研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 章表明. 珊瑚藻溴过氧化物酶的分离纯化及催化特性研究[D]. 中国科学院研究生院. 2011. |
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