由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒

doi:10.3321/j.issn:0023-074X.2003.10.015

CORC > 北京大学 > 生命科学学院

	由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒
	聂玉春 ; 陈建国 ; 丁明孝
刊名	科学通报
	2003
关键词	猪瘟病毒全长cDNA克隆感染性RNA 转染体外转录
DOI	10.3321/j.issn:0023-074X.2003.10.015
英文摘要	通过RT-PCR获得猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)强毒株cF114株(中国标准强毒F114株经PK-15细胞增殖)全长基因组cDNA并测序. 与已知其他几株CSFV代表毒株F114, Brescia, Alfort和C株的核苷酸同源性分别为99.41%, 96.80%, 86.03%和95.70%; 氨基酸同源性分别为99.28%, 98.54%, 93.33%和97.41%. 将获得的各基因片段按病毒基因组顺序连接成全长cDNA, 插入pMC18质粒SalⅠ/ XbaⅠ之间, 得到含病毒全长基因组的重组质粒pMC12297. 用T7 RNA聚合酶进行体外转录, 转录出的RNA转染PK-15细胞, 细胞上清液经扩增后, 测定上清液中病毒滴度. 质粒来源的CSFV(vM12297)在抗原反应性和复制能力方面与父代病毒相似. 将疫苗毒C株囊膜蛋白基因E01和E2分别替换到pMC12297相应位置, 获得嵌合体基因组质粒pM/CE01和pM/CE2, 体外恢复获得嵌合体病毒vM/CE01和vM/CE2. 两种嵌合体病毒均能感染PK-15, SK-6和原代猪睾丸细胞, 间接免疫荧光检测显示较vM12297弱, 在PK-15细胞上滴度达到8×105 F-PFU/mL. 这一工作为进一步研究和探讨CSFV增殖与致弱的机理提供了重要的实验和理论资料.; 国家重点基础研究发展计划(973计划); 国家自然科学基金; 高等学校博士学科点专项科研项目; 中文核心期刊要目总览(PKU); 中国科学引文数据库(CSCD); 0; 10; 1059-1063; 48
语种	中文
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.pku.edu.cn/handle/20.500.11897/46520]
专题	生命科学学院
推荐引用方式 GB/T 7714	聂玉春,陈建国,丁明孝. 由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒[J]. 科学通报,2003.
APA	聂玉春,陈建国,&丁明孝.(2003).由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒.科学通报.
MLA	聂玉春,et al."由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒".科学通报 (2003).