| 题名 | TALEN介导的基因打靶技术在人的多能干细胞中的应用和优化 |
| 作者 | 周小晓 |
| 答辩日期 | 2014-07-01 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 潘光锦 |
| 关键词 | 基因打靶 人多能干细胞 类转录激活因子效应物核酸酶TALEN HBB基因 组蛋白H3K27me3去甲基化酶 |
| 学位名称 | 理学硕士 |
| 其他题名 | Application and Optimization of Transcription Activator-like Effector Nuclease (TALEN)-mediated Gene Targeting Technology in Human Pluripotent Stem Cell |
| 学位专业 | 生物化学与分子生物学 |
| 英文摘要 | 基因打靶是80年代兴起的强有力的基因操作工具，这套技术是在DNA同源重组理论和胚胎干细胞的基础上发展起来的。利用基因打靶技术通过敲除或者插入感兴趣的基因构建一系列动物模型，可广泛应用在研究各种人类遗传病上。然而，在人类多能干细胞中通过传统的同源重组实现准确的基因打靶存在效率极低的问题，据报道近几年出现的类转录激活因子效应物核酸酶TALEN能精确识别和高效切割任何DNA序列，TALEN主要由可编程的、特异的DNA结合序列模块以及非特异的DNA切割模块组成。TALEN具有低脱靶率、弱毒性、简单易于操作等优点。目前TALEN介导的基因打靶技术已被广泛应用在许多物种中，包括人类胚胎干细胞和诱导多能干细胞。本研究介绍了TALEN介导的基因打靶技术可有效对β地中海贫血症患者来源的诱导多能干细胞（iPSC）携带的HBB基因突变位点进行定点修复，并且通过基因测序没有发现由于TALEN的脱靶效应引起的其他位点的基因突变。我们也尝试用TALEN得到UTX或者JMJD3（两者均被证明是组蛋白H3K27三位甲基化的去甲基化酶）敲除的H1细胞系(人胚胎干细胞系)，用于研究在胚胎干细胞定向分化为神经干细胞过程中UTX或者JMJD3对其产生的影响。这些工作进一步说明了人工合成的特异的TALEN可以很好的在人类多能干细胞中进行精确有效的基因修饰工作。实验过程中我们也不断摸索不同的实验条件以求优化这套TALEN介导的基因打靶技术，致力于获得更高的打靶效率和更精确的基因定点修饰。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 生物化学与分子生物学 |
| 页码 | 63 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/1035]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 周小晓. TALEN介导的基因打靶技术在人的多能干细胞中的应用和优化[D]. 广州生物院. 中国科学院研究生院. 2014. |
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