腺病毒载体以其安全、易生产和高效广谱的感染特性得以在基因治疗领域中广泛应用。在已开发的三代腺病毒载体中，高容量腺病毒载体最受青睐，因其删除了所有的病毒编码基因，用作基因治疗载体可以提高外源基因在体内的表达水平以及延长外源基因在体内的滞留时间。但现有高容量腺病毒载体在生产上依赖于辅助病毒，所得病毒产率较低并含有辅助病毒的污染，因而限制其潜在应用。本研究研发了一种利用互补生长原理来生产高容量腺病毒载体的方法：将腺病毒的基因组按结构与功能分配到两个腺病毒载体上，每个载体只能提供腺病毒的部分功能，两个病毒在生长上互相依赖。这样既提高了腺病毒载体的包装能力又提高腺病毒载体的安全性，本文中所得两个载体命名为互补高容量腺病毒载体对。本研究采用三种策略构建互补高容量腺病毒载体对：A+B（60%:50%）策略，X+Y（80%:20%）策略，C4＋D4（90%:10%）策略。其中C4＋D4比较成功，X＋Y的病毒拯救效率需要提高，A+B失败。对C4＋D4组合的互补高容量腺病毒载体对进行了基因组稳定性分析、互补依赖生长特性分析以及生长曲线的描绘。结果发现，1）C4＋D4病毒载体对能够稳定传代，避免因同源重组产生的病毒基因组回复，提高了载体应用的安全性；2）病毒对的生产无需特殊细胞系，在293细胞中，可以达到与第一代腺病毒相当的产量，3）通过定量PCR测定的互补病毒对生长曲线与第一代腺病毒相似，意味着互补病毒对应用于大规模生产可以降低生产成本。4）在腺病毒的E4区可能含有促进腺病毒病毒颗粒包装的信号序列。成功构建互补高容量腺病毒载体对第一次在概念上证明，可将腺病毒的基因组分配到两个载体上，利用两载体之间功能相互补充，生长相互依赖，相互限制的特性进行大量生产高容量腺病毒载体，因此摆脱了构建互补细胞系的必要性，突破了利用辅助病毒过程中的诸多限制，同时也为其它病毒载体的研发提供了新的思路。