| 霉酚酸微生物合成和P450单加氧酶与还原伴侣蛋白的相互作用机制研究 | |
| 齐凤霞 | |
| 2016-05 | |
| 学科主题 | 生物学 |
| 关键词 | 微生物合成 蛋白纯化 霉酚酸 P450 还原伴侣 |
| 文献子类 | 专题报告 |
| 英文摘要 | 本报告围绕微生物生物合成霉酚酸（MPA）和 “微生物生物合成P450单加氧酶与还原伴侣蛋白的相互作用机制”研究课题展开工作，本报告为为下一步的课题进展提供了平台。 内容包括以下三个方面： 1. 在酿酒酵母宿主中表达来自短密青霉的霉酚酸合成相关基因 a) 利用酿酒酵母同源重组系统组装大片段DNA的技术路线，证明了该技术在理性设计组装外源DNA和代谢工程改造酿酒酵母的可行性、高效性和可重复性； b) 分子克隆了来自短密青霉的霉酚酸（MPA）合成相关基因mpaA，mpaDE和mpaC的。针对mpaC突变株开展了发酵实验，通过HPLC未能检测到代谢产物5-MOA；三个蛋白均利用SDS-PAGE和Western Blot检测了蛋白表达情况。 c) 对MPA合成相关基因mpaA进行了密码子优化并蛋白纯化鉴定。 2. 国家优青项目“微生物生物合成P450单加氧酶与还原伴侣蛋白的相互作用机制”研究课题 a) 蓝细菌来源的6个还原伴侣Fdx的分子克隆和蛋白纯化。 b）克隆表达来自天然色链霉菌的18个P450酶基因和6个铁氧化还原蛋白Fdx、4个铁氧化还原蛋白还原酶FDR，对Fdx6密码子优化，并进行了蛋白纯化鉴定. P450和FDR进行了光谱分析。 c）分别采用黄体酮、睾酮、薯蓣皂苷元、丹参酮IIA、麦新米星IV(M-IV)和YC17等多种底物对这些P450和还原伴侣进行了酶催化反应筛选鉴（HPLC检测）。首次发现了天蓝色链霉菌的还原伴侣蛋白用于催化支撑PikC催化YC17合成产物。并且证明在支撑PikC的效力层面，不同组合的还原伴侣可以达到不同的催化效率，合成不同的目的产物。为进一步获得对“P450酶—Fdx—FdR”三蛋白系统相互作用和识别机制的规律性认识做出积累。 3. 其他：对序列未知的米曲霉表达载体pTAex3进行了全测序并获得了图谱等。 |
| 内容类型 | 研究报告 |
| 源URL | [http://ir.qibebt.ac.cn/handle/337004/9804]  |
| 专题 | 青岛生物能源与过程研究所_酶工程团队 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 齐凤霞. 霉酚酸微生物合成和P450单加氧酶与还原伴侣蛋白的相互作用机制研究. 2016. |
| 个性服务 |
| 查看访问统计 |
| 相关权益政策 |
| 暂无数据 |
| 收藏/分享 |
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。
修改评论