| 题名 | 以RNA为引物的等位基因特异性PCR |
| 作者 | 张玲会 |
| 答辩日期 | 2014-05 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 导师 | 唐卓 |
| 关键词 | Rna引物 等位基因特异性pcr Vent(Exo-) Taqm1 |
| 学位专业 | 药物化学 |
| 英文摘要 | 本文基于等位基因特异性的RNA引物和两种嗜热DNA聚合酶建立了一种新型单点突变检测方法，该方法首先根据待检测基因的突变位点设计RNA检测探针，通过PCR指数扩增待检测序列，最终建立了一种简便、快捷、廉价的单点突变检测方法。具体说来，这一检测方法的主要特点表现在以下几个方面：1 PCR体系中运用RNA引物扩增。利用Vent(exo-）DNA 聚合酶可以延伸RNA引物的特性及TaqM1 DNA 聚合酶的逆转录活性，创新性地引入这两种嗜热DNA聚合酶到PCR体系中完成了以RNA为引物的PCR扩增过程。2 将以RNA为引物的PCR和等位基因特异性PCR结合起来检测单点突变。根据突变位点设计RNA引物末端碱基，这样， RNA引物就会与正常模板完全配对，与突变模板3’末端错配，从而使正常模板大量扩增通过琼脂糖凝胶电泳很容易观察到扩增条带，而突变模板不能扩增没有扩增条带。3 该方法设计简便且具有很强的特异性。以DNA为引物时，3’末端的一个错配碱基无法阻止突变模板的扩增，无论是正常模板还是突变模板都能得到大量扩增产物，就需要在DNA引物3’末端第二个碱基设计突变以抑制突变模板的扩增，但这样正常模板也很通常不能扩增产生假阴性，需要大量探针末端几位碱基设计及PCR条件摸索；而以RNA为引物时，只需末端一个碱基的设计能很好的区分正常模板和突变模板。4 该检测方案具有一定的实用性。该方法运用可体外转录大量得到的RNA引物，一定程度上降低了成本。引入的两种酶不需要Mn2+等的催化，扩大了生物学上的应用范围。 综上所述，本文利用等位特异性的RNA引物进行PCR完成了对模板突变位点的检测，实现了一种设计简便、专一性好、快捷、廉价的单点突变检测方法。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 天然产物研究 |
| 产权排序 | 1 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://210.75.237.14/handle/351003/28836]  |
| 专题 | 成都生物研究所_天然产物研究 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 张玲会. 以RNA为引物的等位基因特异性PCR[D]. 中国科学院大学. 2014. |
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