慢病毒介导的p21/Waf1基因沉默增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制及对EJ细胞增殖的抑制作用

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	慢病毒介导的p21/Waf1基因沉默增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制及对EJ细胞增殖的抑制作用
	石洁; 王志平; 李晓娟; 杨兰; 秦晓东; 王莉; 付生军; 陶燕
刊名	肿瘤
	2015
卷号	35 期号:10 页码:1083-1091
关键词	膀胱肿瘤 RNA,小分子干扰慢病毒感染 p21/Waf1基因病毒复制 EJ细胞
英文摘要	目的:沉默人膀胱癌EJ细胞中p21/Waf1基因的表达,并探讨p21/Waf1表达下调对膀胱癌特异性溶瘤腺病毒复制及对EJ细胞增殖的影响。方法:设计并合成特异性针对p21/Waf1基因的shRNA,插入含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)编码基因的pMagic 7.1载体,构建p21/Waf1-shRNA重组慢病毒质粒pLVT1051,并进行PCR和测序鉴定。将pLVT1051、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒。将携带有p21/Waf1-shRNA的慢病毒感染EJ细胞,采用嘌呤霉素筛选p21/Waf1-shRNA稳定转入的EJ细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测p21/Waf1-shRNA稳定感染后EJ细胞中p21/waf1 mRNA和蛋白的表达水平。将膀胱癌特异性溶瘤腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A感染p21/waf1基因沉默的EJ细胞,采用蛋白质印迹法检测病毒复制相关指标E1A和Hexon蛋白的表达水平,MTT法检测腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A对EJ细胞增殖的影响。结果:成功构建了携带有p21/Waf1-shRNA的重组慢病毒表达载体并获得相应的慢病毒;经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定感染的EJ细胞。p21/Waf1-shRNA能明显降低EJ细胞中p21/Waf1 mRNA及蛋白的表达水平,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。膀胱癌特异性溶瘤腺病毒(Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A)作用于p21/waf1基因沉默的EJ细胞后,其病毒复制相关指标E1A和Hexon的表达水平明显上调,对EJ细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.01)。结论:成功建立了p21/Waf1基因沉默表达的EJ细胞,沉默p21/Waf1基因的表达能增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制能力,并对EJ细胞的增殖有明显的抑制作用。
语种	中文
CSCD记录号	CSCD:5550390
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.lzu.edu.cn/handle/262010/187169]
专题	第二临床医学院_期刊论文
推荐引用方式 GB/T 7714	石洁,王志平,李晓娟,等. 慢病毒介导的p21/Waf1基因沉默增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制及对EJ细胞增殖的抑制作用[J]. 肿瘤,2015,35(10):1083-1091.
APA	石洁.,王志平.,李晓娟.,杨兰.,秦晓东.,...&陶燕.(2015).慢病毒介导的p21/Waf1基因沉默增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制及对EJ细胞增殖的抑制作用.肿瘤,35(10),1083-1091.
MLA	石洁,et al."慢病毒介导的p21/Waf1基因沉默增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制及对EJ细胞增殖的抑制作用".肿瘤 35.10(2015):1083-1091.