豌豆蚜温度受体基因Painless的克隆及时间和组织表达

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	豌豆蚜温度受体基因Painless的克隆及时间和组织表达
	魏金金; 曹德盼; 杨婷; 王桂荣
刊名	中国农业科学
	2014
卷号	47 期号:19 页码:3799-3809
关键词	豌豆蚜 TRP通道 Painless 基因表达谱
ISSN号	0578-1752
其他题名	Cloning and Spatio-Temporal Expression of the Thermoreceptor Gene Painless in Pea Aphids (Acyrthosiphon pisum)
英文摘要	【目的】从豌豆蚜(Acyrthosiphon pisum)触角中克隆候选的温度受体基因——Painless,分析该基因所编码的蛋白结构特点,研究该基因在昆虫不同发育时期和不同组织中的表达谱,探讨该基因的功能。【方法】通过生物信息学的方法,使用果蝇(Drosophila melanogaster)Painless从豌豆蚜基因组数据库AphidBase中预测ApisPainless的假定全长序列,之后根据预测得到的假定全长序列,使用Primer premier 5.0设计全长引物,使用RT-PCR 方法从豌豆蚜触角cDNA 中克隆ApisPainless的全长序列,并应用DNAMAN 软件对预测序列与克隆序列进行比对,确定克隆序列与预测序列一致后,使用在线工具SMART(simple modular architecture research tool)对克隆得到的ApisPainless蛋白结构进行预测,分析其序列N 端的锚蛋白重复序列及跨膜域,通过使用在线比对软件Clustal Omega对ApisPainless 与DmelPainless的3个可变剪切型(isoform A、B、C)进行多序列比对,分析ApisPainless的可变剪切类型,通过构建昆虫TRP(transient receptor potential)离子通道超家族的进化树,分析ApisPainless的进化地位,并通过绘图直观地比较TRPA 亚家族4个成员TRPA1、Painless、 Pyrexia和Water witch的序列长短及N端锚蛋白重复序列的差异,使用实时定量荧光PCR 技术,研究ApisPainless在1—4龄若虫以及成虫这5个不同发育时期的相对表达量,以及其在豌豆蚜成虫的触角、头、足和胸腹这4个不同组织中的相对表达量。【结果】预测并克隆得到ApisPainless 全长序列,该基因的全长序列为2 832 bp,编码943个氨基酸,蛋白结构分析表明ApisPainless 具有8个锚蛋白重复序列以及6次跨膜结构,通过序列比较发现ApisPainless 与DmelPainless isform A的相似性最高,达到42.3%。进化树分析结果表明昆虫TRP超家族分为TRPA、TRPC、TRPM、TRPN、TRPV、TRPP 和TRPML 7个亚家族,而ApisPainless 聚类于TRPA亚家族Painless一支,在TRPA亚家族TRPA1、Painless、Pyrexia 和Water witch 这4个成员中,TRPA1的序列最长,约为1 200个氨基酸,其后依次是Water witch、Pyrexia 和Painless,氨基酸数目约有920—1 000个。从N端的锚蛋白重复序列上看,Water witch 和Pyrexia 约有9个重复序列,Painless 约为8个,而TRPA1则高达15—16个,发育时期表达谱分析结果显示ApisPainless 在豌豆蚜的各个发育阶段均有表达,其中以1龄若虫期表达量最高。组织表达谱分析结果显示,ApisPainless 在豌豆蚜的触角、头、足和胸腹各组织中均有表达,其中以在触角中的表达量最高,足中的表达量居其次。【结论】克隆得到的ApisPainless是TRPA亚家族Painlss基因,其在触角及足中表达量高,推测其功能可能类似于果蝇的Painless,参与高温伤害识别、机械刺激识别及味觉探测等过程。
学科主题	昆虫学
语种	中文
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.nais.net.cn/handle/2HMLN22E/138088]
专题	植物保护研究所_功能基因组学与基因安全研究室
作者单位	中国农业科学院植物保护研究所, 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京, 100193
推荐引用方式 GB/T 7714	魏金金,曹德盼,杨婷,等. 豌豆蚜温度受体基因Painless的克隆及时间和组织表达[J]. 中国农业科学,2014,47(19):3799-3809.
APA	魏金金,曹德盼,杨婷,&王桂荣.(2014).豌豆蚜温度受体基因Painless的克隆及时间和组织表达.中国农业科学,47(19),3799-3809.
MLA	魏金金,et al."豌豆蚜温度受体基因Painless的克隆及时间和组织表达".中国农业科学 47.19(2014):3799-3809.