康氏木霉PLA_2基因的克隆及在玉米弯孢菌叶斑病抗性诱导中的作用

CORC > 上海交通大学

	康氏木霉PLA_2基因的克隆及在玉米弯孢菌叶斑病抗性诱导中的作用
	王兵 ; 许志华 ; 刘力行 ; 陈捷
	2012-04-24 ; 2012-04-24
会议名称	中国广东广州中国植物病理学会2008年学术年会
关键词	木霉磷酯酶 A_2 原核表达同源重组
中文摘要	从以 Trichoderma koningii 为出发菌的限制性内切酶介导产生的转化子中克隆了一个与(PLA2) 磷酯酶 A_2家族成员血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)相似的基因 Tkpaf-ah。克隆的基因基因组序列全长1787bp,RT-PCR 扩增全长 cDNA 序列发现在靠近5'端有一个65bp 的内含子,推测的蛋白氨基酸序列长573,BlastX 分析发现在多个植物病原菌中存在与该基因蛋白序列高度相似的功能未知的基因,多序列比对显示该基因蛋白含有 PAF-AH 保守的 GHSFG 结构域和重要的丝氨酸、天冬氨酸和组氨酸酶活性位点。生物信息学软件分析信号肽定位、跨膜区域、豆酰化位点等预测该基因蛋白可能是一个细胞质蛋白。为了确认该基因的磷酯酶活性,利用带有 His 标签的 PET30做原核表达,严谨控制的带有稀有密码子的 Rosseta 能表达,而普通的 BL21没有蛋白产生。在1mM IPTG,37℃ 4h 诱导蛋白绝大多数以包含体的形式存在,优化表达条件在1mM IPTG,28℃和12h 条件下蛋白绝大部分以可溶形式存在。为了研究该基因在木霉生防中的作用,将该基因两侧的1kb 侧翼序列和潮霉素基因融合,原生质体法转化出发菌,得到300多个潮霉素抗性转化子,经过 PCR 筛选,减数分裂稳定和单孢分离,最后 Southern 确认得到一个真正的同源重组敲除子。对敲除子的生物学特性进行分析,发现菌丝生长的最适碳源为可溶性淀粉,最适氮源为酵母浸出汁。在 PDA 平板上培养时敲除子与野生菌在生长速度、菌落形态、产孢量方面没有明显差异,通过对峙培养法分别测定了敲除子与野生菌对玉米弯孢叶斑病菌 CX-3和小斑病菌的抑制作用,结果表明二者均能在一定程度上抑制病原菌的生长。进一步研究发现敲除子能够明显诱导玉米自交系黄早四对弯孢叶斑病菌 CX-3的系统获得抗性,玉米根系经敲除子处理后,与野生菌株的处理相比,玉米叶片弯孢病情指数下降了20.8%。采用台盘兰染色法观察木霉处理过的玉米离体叶片在接种弯孢叶斑病菌 CX-3后的发病程度,发现敲除子的诱导抗性增强,其结果与活体测定一致,故推测 PLA2基因可能以负调控方式参与木霉对玉米的诱导抗性。
会议录	http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=GDKL200807001269&dbname=CPFD2008
会议录出版者	中国农业科学技术出版社
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://ir.calis.edu.cn/hdl/231030/694]
专题	上海交通大学
推荐引用方式 GB/T 7714	王兵,许志华,刘力行,等. 康氏木霉PLA_2基因的克隆及在玉米弯孢菌叶斑病抗性诱导中的作用[C]. 见:中国广东广州中国植物病理学会2008年学术年会.