玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因与色素相关基因相互关系研究

CORC > 上海交通大学

	玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因与色素相关基因相互关系研究
	荆晶 ; 刘铜 ; 范莉莉 ; 刘力行 ; 陈捷
	2012-04-24 ; 2012-04-24
会议名称	中国福建厦门中国植物病理学会第九届全国会员代表大会暨2010年学术年会
关键词	转化子质粒感受态基因表达相关基因酵母双杂交弯孢霉叶斑病菌转化方法酶切多拷贝片段阳性克隆原生质体测序 Trp 基因组黑色素 blotting 酵母菌株 cDNA
中文摘要	玉米弯孢霉叶斑病菌(Curvulaira lunata)产生的毒素和黑色素均是重要的致病因子,因此研究毒素合成相关基因Clt-1和黑色素形成相关基因Brn1的相互关系,有助于更全面揭示弯孢霉叶斑病菌的致病机理。根据已知的Brn1基因序列作为探针,通过Southern blotting确定了Brn1基因以单或多拷贝的形式存在于基因组中,为此,以质粒pSilent-1为基础构建了Brn1基因的RNA干扰载体pSilentBrn1-2,并利用原生质体-氯化钙-聚乙二醇(CaCl_2-PEG)转化方法获得了10个抗潮霉素的转化子,其中转化子T2、T4、T5在菌丝颜色上表现出不同程度的白化现象。通过转化子Southern blotting和RT-PCR验证,发现其干扰载体pSilent-brn1中Brn1基因序列的发夹结构已经整合到基因组中,并且Brn1基因表达有不同程度被抑制,其中转化子T5中Brn1基因表达被沉默程度达79%,菌落表现红棕色,边缘出现白化,表明DHN黑色素合成过程中受阻。通过TLC检测发现T5不能产生所鉴定的毒素分子—(甲基-(5羟甲基)呋喃-2-羧酸盐)。综上述表明:Brn1基因不仅是弯孢霉叶斑病菌黑色素合成途径中关键基因,而且还参与了毒素合成代谢的调控。为了进一步明确两基因是否存在直接的互作关系,本研究正在利用酵母双杂交方法进行研究。已开展工作如下:以玉米弯孢霉叶斑病菌野生菌株CX-3为试验材料,收集生长两天的菌丝提取总RNA,通过RT-PCR得到cDNA,以此为模板用高保真酶扩增出Brn1和Clt-1目的片段,加A尾后做T-A克隆,转化感受态大肠杆菌DH5α,做菌落PCR后并将阳性菌种保存。进一步验证是否连上T载体,即提取质粒后进行酶切,发现目的片段后进行测序,测序结果正确,于是将质粒与相应载体分别酶切并进行连接,构建pGBKT7-Brn1和pGADT7-Clt-1融合质粒。再将融合质粒转入感受态DH5α,将可能含有pGBKT7-Brn1融合质粒的DH5α涂布于含有卡那霉素平板,而pGADT7-Clt-1则涂布于氨卞霉素平板,挑选阳性克隆并做菌液PCR,确认为阳性后提取融合质粒转入酵母菌株AH109中,涂板,共4种平板(-Trp-Leu-Trp-leu-Trp-leu-His-Ade),四缺板上的单菌落再进行X-a-gal显示验证。
会议录	http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=ZGVS201007001124&dbname=CPFD2011
会议录出版者	中国农业科学技术出版社
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://ir.calis.edu.cn/hdl/231030/648]
专题	上海交通大学
推荐引用方式 GB/T 7714	荆晶,刘铜,范莉莉,等. 玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因与色素相关基因相互关系研究[C]. 见:中国福建厦门中国植物病理学会第九届全国会员代表大会暨2010年学术年会.